Oxoid抗(kang)微生物藥(yao)物敏(min)感性(xing)試(shi)驗紙(zhi)片操作流程

操作流程：

提供的材(cai)料：Oxoid抗(kang)微生物藥(yao)物敏感性(xing)試驗紙片。

需要(yao)但(dan)沒有提供的材料：用適當培(pei)養基制成(cheng)的(de)(de)瓊脂平(ping)板、接種用的(de)(de)混懸(xuan)培(pei)養基、無(wu)菌接種環和拭子、無(wu)菌鑷子、麥氏濁度(du)標準(zhun)液、培(pei)養箱、改良的(de)(de)氣體環境、抗生素紙(zhi)片分(fen)配(pei)器、質控(kong)菌種、測量(liang)抑(yi)菌環大(da)小的(de)(de)裝置和當地(di)標準(zhun)方法的(de)(de)判讀標準(zhun)。

方法：Oxoid藥敏(min)紙片(pian)可能會與各(ge)種標準檢測方法一起(qi)使用(yong)，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請參見現行的當地(di)指南，查(cha)找特定(ding)信(xin)息，如推(tui)薦的培養(yang)基(ji)、接(jie)種物濃度(du)水(shui)平和培養(yang)條件等。

質控程(cheng)序：建議以適(shi)當的(de)(de)間隔檢(jian)測(ce)質(zhi)控(kong)菌(jun)株(zhu)，可(ke)以在每次做試驗(yan)時進(jin)行，也可(ke)以根據國(guo)家標準(zhun)機(ji)構提供的(de)(de)抗生素敏(min)感性(xing)檢(jian)測(ce)指(zhi)南推(tui)薦的(de)(de)程序。如果質(zhi)控(kong)微生物對特(te)定抗生素的(de)(de)檢(jian)查結(jie)(jie)果在規(gui)定的(de)(de)范圍(wei)以外，不得報告患者(zhe)的(de)(de)檢(jian)查結(jie)(jie)果，并不得使用該藥(yao)敏(min)紙片，直至(zhi)確定了產生這(zhe)種不一致(zhi)結(jie)(jie)果的(de)(de)原(yuan)因（例(li)如培(pei)養(yang)基(ji)、灌裝量、接種物、培(pei)養(yang)條件、質(zhi)控(kong)菌(jun)株(zhu)或者(zhe)藥(yao)敏(min)紙片儲存或使用不正確）。

限制(zhi)：本產品供(gong)(gong)體(ti)外診斷使(shi)用，僅用于指示供(gong)(gong)試(shi)微(wei)生(sheng)物的(de)體(ti)內(nei)(nei)敏感性。選擇(ze)何(he)種(zhong)抗微(wei)生(sheng)物藥(yao)(yao)物進行測試(shi)和報告必須由每個臨床實驗(yan)室來決定。臨床醫(yi)生(sheng)負責決定使(shi)用何(he)種(zhong)抗生(sheng)素(su)對抗供(gong)(gong)試(shi)微(wei)生(sheng)物，同時應考慮(lv)可能影響藥(yao)(yao)物體(ti)內(nei)(nei)活性的(de)其它(ta)因素(su)。

臨床實驗室標準化協(xie)會（CLSI）方法小結（其它標(biao)準有(you)所不同）：培養(yang)(yang)基(ji)：Mueller-Hinton瓊脂(zhi)用(yong)(yong)于(yu)(yu)檢(jian)測(ce)非苛養(yang)(yang)微生(sheng)物(wu)。Mueller-Hinton加(jia)5%綿羊血用(yong)(yong)于(yu)(yu)檢(jian)測(ce)腦膜炎奈瑟氏菌(jun)和(he)(he)鏈球菌(jun)，GC瓊脂(zhi)加(jia)1%規定的生(sheng)長添加(jia)劑用(yong)(yong)于(yu)(yu)檢(jian)測(ce)淋病奈瑟氏菌(jun)。嗜(shi)(shi)血桿菌(jun)檢(jian)測(ce)培養(yang)(yang)基(ji)用(yong)(yong)于(yu)(yu)檢(jian)測(ce)流(liu)感嗜(shi)(shi)血桿菌(jun)和(he)(he)副流(liu)感嗜(shi)(shi)血桿菌(jun)。其它苛養(yang)(yang)菌(jun)或很少檢(jian)測(ce)的細菌(jun)所用(yong)(yong)的培養(yang)(yang)基(ji)和(he)(he)檢(jian)測(ce)條件可在(zai)CLSI M45中找(zhao)到。平(ping)板和(he)(he)藥敏紙(zhi)片在(zai)使用(yong)(yong)前要在(zai)室溫下(xia)平(ping)衡。平(ping)板在(zai)接(jie)種細菌(jun)前不應太潮(chao)濕。

供試微生物：采(cai)取適當的(de)檢(jian)測方法(fa)來核實供(gong)試微(wei)生物(wu)(wu)的(de)推(tui)測鑒定結(jie)果。采(cai)用直接(jie)(jie)菌落法(fa)或生長法(fa)制備標(biao)準化的(de)接(jie)(jie)種(zhong)物(wu)(wu)并在制備好(hao)的(de)15分鐘內接(jie)(jie)種(zhong)到(dao)平板上(shang)：生長法(fa)－用接(jie)(jie)種(zhong)環蘸取3至5個形態上(shang)相似的(de)菌落，并將其(qi)轉(zhuan)移到(dao)4-5 ml的(de)胰蛋白胨大豆肉湯或

類似培養基中。在35℃下培養2-6小時。用無菌鹽水或肉湯調整濁度，使濁度等于0.5 麥氏濁度標準（制備0.5 麥氏濁度標準液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標準液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥氏濁度標準的菌懸液。

接種：將(jiang)無菌拭子浸入(ru)菌懸液中，對著(zhu)試管壁旋轉按壓，擠出多余(yu)的液體(ti)。沿(yan)著(zhu)至少三個方向涂(tu)布平板(ban)(ban)表面。應在接種的15分鐘內(nei)將(jiang)藥敏(min)紙片放到平板(ban)(ban)上。

藥敏紙片：使用前要(yao)將藥敏(min)紙(zhi)片放置于室(shi)溫下(xia)(xia)。每(mei)塊(kuai)平(ping)板推薦的試驗藥敏(min)紙(zhi)片數量如(ru)下(xia)(xia)：

在(zai)貼上藥敏紙片的15分(fen)鐘(zhong)內(nei)翻轉平板，并按照(zhao)下面(mian)的規定培養

*葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)和腸球(qiu)菌(jun)(jun)需(xu)要(yao)培養24小時。耐甲氧西(xi)林的(de)(de)葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)可能在溫度超過(guo)35℃的(de)(de)條件下檢測(ce)不出(chu)來(lai)。

判(pan)讀：培養后(hou)，測量細(xi)(xi)菌(jun)生(sheng)長*抑制區域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)直徑，到mm。抑菌(jun)環(huan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)邊緣應為肉眼可以(yi)發現的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無明顯微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)(de)區域。血平(ping)板(ban)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)果(guo)利(li)用反射光(guang)從(cong)平(ping)板(ban)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)上(shang)(shang)表(biao)面讀(du)(du)取（不用讀(du)(du)取溶血環(huan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)邊緣，而是細(xi)(xi)菌(jun)生(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)(de)邊緣）。所有其它(ta)(ta)培養基(ji)要使(shi)用黑色背(bei)景和反射光(guang)從(cong)平(ping)板(ban)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)背(bei)面判(pan)讀(du)(du)（葡萄(tao)球菌(jun)和腸(chang)球菌(jun)除(chu)外，它(ta)(ta)們采用投射光(guang)讀(du)(du)取－有微(wei)弱(ruo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)長表(biao)明有耐(nai)藥(yao)性(xing)）。如果(guo)是變形桿菌(jun)，忽略在明顯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑菌(jun)環(huan)上(shang)(shang)生(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一層薄薄菌(jun)膜。對(dui)結(jie)果(guo)進行(xing)判(pan)讀(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)完(wan)整說明可依照CLSI方法(fa)，請參(can)考現行(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)CLSI M100標準(zhun)。下表(biao)只詳細(xi)(xi)說明了在CLSI標準(zhun)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)那些藥(yao)物(wu)/濃(nong)度。與其它(ta)(ta)標準(zhun)方法(fa)一起使(shi)用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)其它(ta)(ta)藥(yao)物(wu)和濃(nong)度可從(cong)Oxoid獲(huo)得(de)，但沒有在本說明書中(zhong)詳細(xi)(xi)列出。

*部分(fen)摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥(yao)敏(min)紙片擴散法補充表(biao)”抗微生(sheng)物(wu)藥(yao)物(wu)敏(min)感性試驗性能(neng)標(biao)準(zhun)。可從臨床和實驗室標(biao)準(zhun)化協(xie)會（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標(biao)準(zhun)。