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抗(kang)萬古霉(mei)素腸球菌（VRE）顯色培(pei)養基使用說明書

法國科瑪嘉VRE顯色培養基

用于(yu)耐萬古霉素糞(fen)腸(chang)球菌（E.faecalis）和尿腸(chang)球菌(E.faecium)的鑒(jian)定和計數。

【組分】

瓊脂                               15.0g/L

蛋白胨(dong)和酵母浸(jin)出物(wu)                 20.0 g/L

色素                               27.3 g/L

鹽(yan)類(lei)                               5.0 g/L

PH                                6.8±0.2

根據需要，可以(yi)進行經典配方的調整或(huo)補(bu)充。

【操作】

1. 稱取(qu)瓶(ping)內(nei)干粉(fen)67.3g，用1000ml蒸餾水或(huo)純水溶解，可以按照67.3 g/L的比例擴大或(huo) 縮(suo)小。
2. 將(jiang)上(shang)述干(gan)粉緩慢倒入蒸餾水中，充分攪拌直至(zhi)瓊(qiong)脂*溶(rong)解。
3. 加熱(re)至100℃，并(bing)且不斷(duan)攪拌。如果(guo)使用(yong)高壓鍋，請不要加壓，加熱(re)不能超(chao)過(guo)100℃。使用(yong)微波爐(lu)加熱(re)時，在煮沸后(hou)(hou)立即移出微波爐(lu)并(bing)不斷(duan)攪拌，而后(hou)(hou)移入微波爐(lu)再加熱(re)，直至*溶(rong)解（大氣泡代替泡沫產生，大約需要2分鐘）。
4. 把VRE基(ji)(ji)礎(chu)(chu)培養基(ji)(ji)冷卻至45－50℃備用(yong)，此基(ji)(ji)礎(chu)(chu)培養基(ji)(ji)為乳白色。
5. 取增補劑一瓶，加(jia)入(ru)1ml 54%酒精(jing)溶解，以無菌操作把增補劑加(jia)入(ru)到備用的基礎(chu)培養基中，輕(qing)輕(qing)混合均勻(使其終濃度(du)為60mg/L)，避免(mian)氣泡(pao)，也可按(an)照60mg/L的比例擴大或縮小 。
6. 使用傾注程序：準備(bei)直徑為90mm的(de)已(yi)滅菌(jun)的(de)帶蓋培養皿，每個培養基(ji)接種1ml樣品，然(ran)后傾注混合均勻的(de)培養基(ji) 15±1ml，混合均勻使其(qi)凝固，倒置，37℃培養16小時(shi) ,24小時(shi) 和48小時(shi)，觀察結果(guo) 。
7. 如果(guo)使用表面接(jie)種程序：將培(pei)養基傾注于(yu)已滅(mie)菌的(de)培(pei)養皿中（用前(qian)貯存于(yu)2－8℃，避光，接(jie)種前(qian)應(ying)先(xian)恢復至室溫）。樣(yang)品劃線接(jie)種或者涂布接(jie)種于(yu) 培(pei)養基表面，在37℃培(pei)養18小(xiao)時(shi)，24小(xiao)時(shi)和48小(xiao)時(shi)，觀察結果(guo)。

【貯存】

1、法國科瑪嘉VRE顯色培養基干粉需保(bao)存(cun)在15-30℃干燥環(huan)境中，增補劑保(bao)存(cun)于(yu)2－8℃環(huan)境下。

2、傾注好的培養基(ji)在室(shi)溫可保存一(yi)天，2－8℃冰箱中避(bi)光可以貯存兩星期。

【結果】

★ 極(ji)少數(shu)其他菌(jun)屬菌(jun)株如(ru)乳酸桿菌(jun)素可能呈現很小(xiao)的紫色菌(jun)落。

★ 使用過(guo)的(de)培養基需(xu)要在121℃滅菌(jun)至少20分(fen)鐘才可以(yi)按照有關規定(ding)丟棄。